液(ye)相(xiang)色(se)譜儀6大檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)是(shi)什么(me)?檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)的(de)作用(yong)(yong)是(shi)將色(se)譜柱流出物中樣品組成和(he)含量的(de)變化轉化為可供檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的(de)信(xin)號,從而定(ding)性定(ding)量分析待測(ce)(ce)組分。需要掌握不同檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)的(de)原理。液(ye)相(xiang)色(se)譜儀常用(yong)(yong)的(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)包括(kuo)紫外檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)、熒光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)、示差(cha)折光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)、蒸發光(guang)散射檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)、化學發光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)、質譜檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器(qi)(qi)等(deng)。
紫外(wai)檢測器(UVD)
是目前液(ye)相色譜中應用(yong)最廣泛的(de)檢測(ce)器。自然界中大部(bu)分有(you)(you)機物(wu)(wu)和部(bu)分無機物(wu)(wu)都(dou)具(ju)有(you)(you)紫外(wai)吸(xi)收能力,UV檢測(ce)器根據(ju)化合(he)物(wu)(wu)對紫外(wai)光(guang)(guang)(guang)的(de)吸(xi)收能力,通過二極(ji)管將光(guang)(guang)(guang)信號(hao)轉變為電信號(hao),從而進行分析(xi)。它(ta)有(you)(you)兩個流通池(chi),一個作參比,一個作測(ce)量(liang)用(yong),光(guang)(guang)(guang)源(yuan)發出(chu)的(de)紫外(wai)光(guang)(guang)(guang)照射(she)到流通池(chi)上(shang),若兩流通池(chi)都(dou)通過純的(de)均勻溶劑(ji),則它(ta)們在紫外(wai)波長下幾乎無吸(xi)收,光(guang)(guang)(guang)電管上(shang)接受(shou)到的(de)輻射(she)強度相等,無信號(hao)輸(shu)出(chu)。當(dang)組分進入測(ce)量(liang)池(chi)時(shi),吸(xi)收一定(ding)的(de)紫外(wai)光(guang)(guang)(guang),使(shi)兩光(guang)(guang)(guang)電管接受(shou)到的(de)輻射(she)強度不等,這時(shi)有(you)(you)信號(hao)輸(shu)出(chu),輸(shu)出(chu)信號(hao)大小與組分濃(nong)度有(you)(you)關。
使用(yong)過紫外(wai)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器(qi)的(de)(de)人應該都(dou)會發(fa)現(xian),很多(duo)標準方法中都(dou)是(shi)(shi)以254nm作為檢(jian)(jian)(jian)測(ce)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)的(de)(de),那(nei)為什么(me)是(shi)(shi)這個波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)呢?因(yin)為在液相(xiang)色譜檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器(qi)的(de)(de)發(fa)展過程(cheng)中使用(yong)最(zui)久的(de)(de)是(shi)(shi)低壓汞燈(deng),而汞的(de)(de)最(zui)大發(fa)射波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)是(shi)(shi)253.7nm,也就(jiu)是(shi)(shi)說在254nm波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)下,燈(deng)能量最(zui)高,檢(jian)(jian)(jian)測(ce)靈敏度最(zui)好。但現(xian)階段,很多(duo)紫外(wai)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器(qi)采用(yong)的(de)(de)是(shi)(shi)氘燈(deng),這時候254nm的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)其實意義不大,氘燈(deng)的(de)(de)使用(yong)范圍(wei)一般是(shi)(shi)190-800nm,需要考慮化(hua)合物的(de)(de)最(zui)大吸收(shou)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)并且(qie)避開(kai)流動相(xiang)的(de)(de)吸收(shou)干擾(rao)來選(xuan)擇合適的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)。這就(jiu)限制了其流動相(xiang)的(de)(de)選(xuan)擇范圍(wei),一般檢(jian)(jian)(jian)測(ce)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)要避開(kai)溶劑截止波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)20nm以上。
熒光檢測器(qi)(FLD)
是(shi)目前液(ye)相色(se)譜靈(ling)敏度最高的(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器,應(ying)用(yong)(yong)廣泛,選擇性強。適用(yong)(yong)于(yu)能激發熒(ying)光(guang)的(de)化合物。很(hen)多與生(sheng)命科(ke)學有關的(de)物質,如氨基酸(suan)、胺類、維生(sheng)素、甾族化合物及某些代謝藥物都可(ke)以(yi)用(yong)(yong)熒(ying)光(guang)法檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。熒(ying)光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)器在(zai)(zai)生(sheng)物樣品痕(hen)量(liang)分析中具有重要作用(yong)(yong),尤其(qi)在(zai)(zai)用(yong)(yong)熒(ying)光(guang)衍生(sheng)后,可(ke)以(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)很(hen)微(wei)量(liang)的(de)氨基酸(suan)和(he)肽。在(zai)(zai)實驗過(guo)程(cheng)中需要嚴格(ge)脫氣(qi),因為(wei)系統中殘留的(de)氧氣(qi)會(hui)引發熒(ying)光(guang)淬滅反應(ying),造(zao)成峰(feng)(feng)面積大(da)幅(fu)下降甚至不出峰(feng)(feng)。
示差折光檢測(ce)器(RID)
是(shi)一種通用(yong)(yong)型檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器,利用(yong)(yong)物質的(de)折(zhe)(zhe)光(guang)效應(ying),對所有物質均有響應(ying),只要(yao)被測(ce)組(zu)分與洗脫液的(de)折(zhe)(zhe)光(guang)指數(shu)有差別就可使用(yong)(yong)。生命科學中常遇到(dao)各類(lei)糖類(lei)化(hua)合物、脂肪烷烴等,沒有紫外吸收,一般常用(yong)(yong)示(shi)差折(zhe)(zhe)光(guang)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器。它的(de)通用(yong)(yong)性比(bi)UVD廣,但靈敏(min)度要(yao)低,對溫度變化(hua)敏(min)感,是(shi)所有檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器中對溫度要(yao)求最高的(de)。另外,不(bu)同的(de)流動相(xiang)(xiang)比(bi)例,其密(mi)度或者折(zhe)(zhe)光(guang)系(xi)數(shu)不(bu)同,如果流動相(xiang)(xiang)比(bi)例發生改(gai)變,則會引起(qi)基線的(de)持續(xu)變化(hua),因此示(shi)差折(zhe)(zhe)光(guang)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)器只能采(cai)用(yong)(yong)等度洗脫,不(bu)能采(cai)用(yong)(yong)梯度洗脫,這(zhe)也(ye)限制(zhi)了它的(de)使用(yong)(yong)。
蒸發光(guang)散射檢測器(ELSD)
也是一種(zhong)通用(yong)型(xing)的(de)檢(jian)測器(qi),原(yuan)理是利用(yong)光散(san)射效應,可(ke)(ke)檢(jian)測揮(hui)發(fa)性低于流動(dong)相(xiang)的(de)任(ren)何樣品(pin),通過(guo)霧化(hua)器(qi)去除溶劑(ji),讓化(hua)合(he)物(wu)形成懸浮(fu)顆粒,從(cong)而(er)形成散(san)射效應。ELSD靈敏度(du)比(bi)RID高,對(dui)溫度(du)變化(hua)不敏感(gan),基線穩定(ding),可(ke)(ke)用(yong)于梯(ti)度(du)洗脫(tuo),并且可(ke)(ke)在(zai)沒有標準品(pin)和(he)化(hua)合(he)物(wu)結構參數未(wei)知的(de)情況下(xia)檢(jian)測未(wei)知化(hua)合(he)物(wu),但(dan)不能使用(yong)不揮(hui)發(fa)的(de)鹽類(lei)溶劑(ji),而(er)要用(yong)醋(cu)酸(suan)銨之(zhi)類(lei)的(de)揮(hui)發(fa)性緩沖鹽來(lai)代替。現在(zai)ELSD已被(bei)廣泛(fan)應用(yong)于碳水化(hua)合(he)物(wu)、類(lei)脂、脂肪酸(suan)和(he)氨基酸(suan)、藥物(wu)以及聚合(he)物(wu)等的(de)檢(jian)測。
化學(xue)發光檢(jian)測器(qi)(CD)
化(hua)(hua)學(xue)發光(guang)檢測器(qi)(qi)是(shi)近年來(lai)發展起(qi)來(lai)的一(yi)種快速(su)、靈敏的新型檢測器(qi)(qi),因其設(she)備簡(jian)單、價廉(lian)、線性范圍寬等優(you)點。其原理是(shi)基于(yu)某些物(wu)質在常(chang)溫下進行化(hua)(hua)學(xue)反(fan)應,生成處(chu)于(yu)激(ji)發態(tai)(tai)勢(shi)反(fan)應中間體或(huo)反(fan)應產(chan)物(wu),當它(ta)們從激(ji)發態(tai)(tai)返回基態(tai)(tai)時(shi),就(jiu)發射(she)(she)出(chu)光(guang)子。由于(yu)物(wu)質激(ji)發態(tai)(tai)的能量是(shi)來(lai)自化(hua)(hua)學(xue)反(fan)應,故叫作(zuo)化(hua)(hua)學(xue)發光(guang)。當分離組(zu)分從色譜柱(zhu)中洗(xi)脫出(chu)來(lai)后(hou),立即(ji)與(yu)(yu)適當的化(hua)(hua)學(xue)發光(guang)試劑混合,引(yin)起(qi)化(hua)(hua)學(xue)反(fan)應,導致發光(guang)物(wu)質產(chan)生輻(fu)射(she)(she),其光(guang)強度與(yu)(yu)該物(wu)質的濃度成正比。該檢測器(qi)(qi)不(bu)需要(yao)光(guang)源,也不(bu)需要(yao)復雜的光(guang)學(xue)系統,只要(yao)有恒流泵(beng),將化(hua)(hua)學(xue)發光(guang)試劑以一(yi)定(ding)的流速(su)泵(beng)入混合器(qi)(qi)中,使之(zhi)與(yu)(yu)柱(zhu)流出(chu)物(wu)迅(xun)速(su)而又均勻地混合產(chan)生化(hua)(hua)學(xue)發光(guang),通過光(guang)電倍增管將光(guang)信號(hao)變成電信號(hao),就(jiu)可進行檢測。這種檢測器(qi)(qi)的最小檢出(chu)量可10-12g。
質譜(pu)檢測器(MSD)
也是(shi)一(yi)種通用(yong)型(xing)檢(jian)(jian)測器(qi),在靈敏度(du)(du)、選擇性(xing)、通用(yong)性(xing)及化合物(wu)的(de)分子量(liang)和結(jie)構(gou)信息的(de)提供等方面都有突出的(de)優點(dian)。但(dan)它(ta)的(de)昂貴操作費(fei)用(yong)和復雜性(xing)在一(yi)定程度(du)(du)上(shang)限制了它(ta)的(de)推廣(guang)應用(yong)。理解了這些檢(jian)(jian)測器(qi)的(de)原理可(ke)以幫(bang)助我們在實驗中更好(hao)地(di)選擇和使用(yong)檢(jian)(jian)測器(qi),更高效率地(di)完成檢(jian)(jian)測任務。
以上(shang)就(jiu)是小編為(wei)大家(jia)帶來的解析,看完這篇(pian)文章大家(jia)是不是對液(ye)相色譜(pu)儀又有了(le)進一步(bu)的了(le)解?